Aislamiento, clonación y estudio in silico de los genes accoxidasa, accsintasa, a Expansina y Endoglucanasa en guayaba (Psidium guajava L.)

Abstract

RESUMEN La guayaba es un fruto climatérico perteneciente a la familia Myrtaceae. Su presencia en el mercado ha ido en aumento pues es un fruto apreciado por su agradable sabor y bondades nutricionales. Entre los principales problemas relacionados con su comercialización, se tiene el de las pérdidas por sobremaduración. La maduración de los frutos climatéricos es un proceso que involucra cambios en los que etileno es un factor importante, como el aumento en la respiración del fruto, la concentración de azúcares, el ablandamiento, entre otros. El etileno es una fitohormonasintetizada por dos enzimas clave, la ACCsintasayACCoxidasa, que regulala expresión de otros genes relacionados con la maduración como las α-expansinas y las endoglucanasas que modifican la pared celularproduciendo el ablandamiento del fruto. El estudio de estos genes son el objeto de estudio de este trabajo. La construcción de bancos genómicos de guayaba permitió la identificación y aislamiento de clonas genómicas. La identificación de estos genes se realizó mediante la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), aplicada tanto a los bancos generados como al ADN nuclear. El aislamiento de clonas positivas de estos genes se realizó por medio de minipreparaciones (miniprep) y PCR. El tamaño de los insertos se determinó por digestión doble con endonucleasas de restricción del plásmido purificado. El análisis tipo SouthernBlot para cada gen en los cuatro bancos generados reveló que estos genes están presentes en al menos una copia en cada uno de los bancos genómicos de guayaba.