Determinación de la distribución de actina en células de tejido pulmonar de cerdo con pleuroneumonía porcina crónica

Abstract

A través de un muestreo aleatorio realizado en el Rastro Municipal de San Francisco de los Romo, Aguascalientes, se detectó pleuroneumonía porcina crónica en el 60% de los cerdos. Las lesiones pulmonares encontradas fueron empleadas para determinar los cambios morfológicos producidos por la enfermedad, la presencia de fibrosis debida a colágena, así como la distribución de actina filamentosa y no filamentosa. Para lo anterior se emplearon muestras provenientes de 22 animales con lesiones características de la enfermedad así como muestras provenientes de pulmones de 3 cerdos sanos, empleados como control. De las lesiones necróticas se aisló el agente causal de la enfermedad: Actinobacillus pleuropneumoniae, empleando como cepa nodriza Staphylococcus aureus, una vez aislada la bacteria se le realizó tinción negativa y caracterización bioquímica empleado galerías Api NE. Las cepas así aisladas no requirieron NAD para crecer, por lo que se clasificaron como biotipo 2. Se realizó técnica histológica en muestras de las lesiones y muestras control. Para determinar los cambios morfológicos se empleó tinción H-E, y tinción tricrómica de Masson para determinar la presencia de fibras de colágena. Se encontró infiltrado linfático asociado al engrosamiento de los tabiques interalveolares, hemorragia intersticial y daño en epitelio bronquial. También se encontró aumento de fibras de colágena asociado con el engrosamiento de los tabiques interalveolares. La presencia de la bacteria en las lesiones fue hecha empleando técnica inmunohistoquímica usando tanto sueros de cerdos convalecientes de la enfermedad, como un anticuerpo policlonal dirigido contra las proteínas totales de A. pleuropneumoniae. La bacteria se observó asociada al epitelio bronquiolar, en la lámina propia de los bronquiolos, en los intersticios de los tabiques interalveolares, así como en el interior de neutrófilos y macrófagos. Utilizando un anticuerpo monoclonal dirigido contra actina de cerebro de v rata mediante técnica inmunohistoquimica, se observó un fuerte reconocimiento del músculo liso de bronquios y vasos sanguíneos, en algunas células alveolares y en las zonas de ruptura de tabiques interalveolares. Adicionalmente se realizó el marcaje de actina-F con faloidina Alexa 594, los resultados de este marcaje fueron observados por microscopía láser confocal. En los pulmones sanos se mostró una mayor cantidad de actina F asociada a el músculo liso de bronquiolos y vasos sanguíneos, marcaje difuso en el epitelio y poca marca en la lámina propia del epitelio. Mientras que en el tejido infectado se mostró una disminución en la actina F presente en el músculo liso, así como un aumento en la lámina propia del epitelio. La fluorescencia fue difusa en las células epiteliales del bronquiolo en comparación de la presente en las muestras de pulmón sano.