Desarrollo de herramientas biotecnológicas para la propagación masiva y mejoramiento de especies del género Agave

Abstract

La falta de sistemas eficientes de propagación es un factor que limita el aprovechamiento racional de varias especies de Agave, que en muchos casos han tenido una reducción peligrosa de sus poblaciones debido a la sobreexplotación de materiales silvestres. En este estudio se desarrollaron protocolos para la propagación in vitro de A. cupreata, A. difformis, A. karwinskii, A. obscura y A. potatorum. Como explantes se utilizaron tejidos meristemáticos extraídos de plántulas germinadas in vitro. Se logró la formación de brotes múltiples en explantes basales en medio MS adicionado con 30 g L-1 de sacarosa, 8 g L-1 de agar y varios tratamientos con citocininas [6-bencilaminopurina (BA), 6-γ,γ-dimetil amino purina (2iP), cinetina (Cin), tidiazurón (TDZ) y meta-topolina o N6-(meta-hidroxibencil)adenina (MT)]. Para A. cupreata el mejor tratamiento resultó ser 1.5 mg L-1 de BA, con un promedio de 10.5 brotes por explante. Para A. difformis, el tratamiento que mejores resultados proporcionó fue 0.2 mg L-1 de TDZ con un promedio de 8.5 brotes por explante. El mayor número de brotes por explante, para A. karwinskii se generó con la concentración de 1.0 mg L-1 de BA, con un promedio de brotes por explante de 6.1. La especie A. obscura, produjo el mayor número de brotes por explante con el tratamiento cuya concentración fue de 0.2 mg L-1 de TDZ, con un promedio de brotes por explante de 11.0. El tratamiento con la concentración 3.0 mg L-1 de Cin, propició el mayor número de brotes por explante en la especie A. potatorum con un promedio de 6.9. Los resultados obtenidos demuestran que es posible la propagación masiva in vitro a través de la brotación partiendo de meristemos basales de las cinco especies de Agave propuestas. Las plántulas obtenidas se transfirieron a suelo y fueron trasladadas a condiciones de invernadero, lográndose una sobrevivencia de 53.33 al 100 %. Se desarrolló tejido calloso de todas las especies, pero sólo de A. cupreata se generó organogénesis indirecta a partir de tejido calloso obtenido. Se aisló ADN de buena calidad en todas las especies y se aplicó la técnica RAPD. Se obtuvieron las amplificaciones por PCR para varios oligos, y se eligieron las bandas obtenidas con los oligos OPA-01, OPA-02, OPA-03, OPA-10 y OPA-13 para realizar el análisis genético. Para esto se utilizaron los programas Arlequín, S-plus y Statistical. Con los resultados se construyó un dendrograma para las distancias genéticas.