Eficiencia de diferentes sistemas de cultivo in vitro en raíces transformadas de cactáceas

Abstract

Resumen El 85% de las 60 especies de cactáceas inoculadas con Agrobacterium rhizogenes A4, generaron raíces, de éstas el 31.4% presentaron 10 o más raíces por explante. Mammillaria hutchisoniana subsp. louisae mostró el mayor porcentaje de explantes con raíces, con 52.5%, por otro lado el mayor número de raíces por explante lo presentó Coryphantha clavata, y la especie Browningia candelaris exhibió la mayor longitud de raíces. El 49% de las especies presentaron ramificaciones. De las 45 especies a las que se les hizo la prueba GUS, el 93.33% presentaron actividad ß-glucoronidasa. En el sistema en medio líquido con y sin agitación hubo crecimiento de raíces, ramificaciones e incluso generación de raíces, estas respuestas no se representan en las curvas de crecimiento, por ejemplo M. hutchisoniana subsp. louisae aumentó su número de raíces pero disminuyó su biomasa. La especie B. candelaris, al colocarla en el biorreactor RITA® presentó generación de raíces, raíces de mayor longitud, una gran ramificación y engrosamiento de las raíces en pocos días. En cuanto a la especie Myrtillocactus schenckii sólo presentó generación de raíces y engrosamiento. La presencia de los genes rol B, nptII y gus en el ADN de raíces transformadas se verificó mediante la reacción en cadena de la polimerasa, siete especies resultaron positivas. Se evaluó la producción de metabolitos secundarios en 10 especies mediante TLC por tres sistemas de detección: reactivo de Dragendorff, UV-365 nm y reactivo de Marquis, en raíces transformadas y en tejido normal, mostrando la presencia de metabolitos secundarios, donde algunas raíces transformadas exhibieron capacidad biosintética cualitativamente similar y otras diferente en relación con el tejido normal.

Abstract The 85% of the 60 Cacti species inoculated with Agrobacterium rhizogenes A4, generated roots, 31.4% of these presented 10 or more roots per explant. Mammillaria hutchisoniana subsp. louisae showed the highest percentage of explants with roots, with 52.5%, in other hand the highest number of roots per explant was presented in Coryphantha clavata species, and the species Browningia candelaris exhibited the maximum length of roots. The 49% of the species showed ramifications. Of the 45 species that were probed the GUS test, the 93.33% presented ß-glucuronidase activity. In the liquid medium system with and without agitation were roots and branches growth and even roots generation, these responses are not shown in the growth curves, for example M. hutchisoniana subsp. louisae increased its roots number but decreased it biomass. The species B. candelaris, when placed in the RITA ® bioreactor showed generation of roots, roots with bigger length, a great branch and thickening of the roots in a few days. Regarding the species Myrtillocactus schenckii only presented generation of roots and thickening. The presence of rol B, nptII and gus genes in DNA of the transformed roots was verified by analyzing the polymerase chain reaction, seven species were positive. The production of secondary metabolites was evaluated by TLC in 10 species by three detection systems: Dragendorff reagent, UV-365 nm and Marquis reagent, in roots transformed and normal tissue, showing the presence of secondary metabolites, some transformed roots exhibited biosynthetic capacity qualitatively similar and others showed different capacity in relation to normal tissue.