Detección de glicomacropéptido por inmunoensayos en leche de cabra como indicativo de adulteración con suero de quesería caprino

Abstract

RESUMEN. En México y en el mundo la demanda de derivados de leche caprina se ha incrementado paulatinamente por sus propiedades biológico-químicas y benéficas para la salud. Una práctica común de los productores de leche es la adulteración de esta con suero de quesería (SQ), lo que hace que tenga una mayor utilidad, sin embargo esto afecta a industrializadores pues tiene un efecto negativo en el rendimiento y las características nutrimentales del producto a obtener. Es necesario, por lo tanto, una metodología rápida, eficaz, sensible y precisa para detectar SQ de leche de cabra. Los inmunoensayos cumplen estos requisitos. El GMP es obtenido de la κ-caseína durante la elaboración del queso por la acción de la quimiosina, estando presente en el SQ pero no en la leche. En este trabajo se desarrollaron dos inmunoensayos, un inmunoblot y un sistema ELISA tipo sándwich, para detectar GMP caprino (GMPc) como indicador de adulteración de la leche con SQ, utilizando un anticuerpo policlonal anti-GMP bovino (GMPb). Primeramente fue necesario comprobar la reactividad de los anticuerpos policlonales anti-GMPb (que ya se habían generado en el laboratorio) frente al GMPc, detectándose dos fracciones proteicas (11.26 y 9.12 kDa) de peso molecular diferentes en la fracción mas pesadas y similar en la fracción ligera respecto con el GMP bovino comercial. El inmunoblot tuvo un limite de detección de 0.5% v/v con un tiempo de realización de 8h. El sistema ELISA se desarrolló y se estandarizó con los títulos de los reactantes: anticuerpo de captura (anti-GMP), antígeno (GMPc) y anticuerpo marcado (anti-GMP*) y el tiempo mínimo de reacción de los mismos que dieron respuestas máximas de absorbancia. Estos fueron: anti-GMP de 0.2254 μg/ml, anti-GMP* 0.0073 μg/ml y para el GMPc 0.75μg/ml. Los tiempos de incubación de los reactantes fueron de 1h para el suero de quesería caprino, 1h para anti-GMP conjugado con biotina, 1h de la enzima Extravidina peroxidasa® y 1 h de sustrato OPD, con una duración total de la metodología de 4.5h, este ensayo se obtuvo un LD de 0.0019% . Ambos ensayos son una buena alternativa para aplicarse en el análisis de leche de cabra en las industrias lácteas para control de calidad de sus productos.

SUMMARY. In Mexico and all over the world the demand for goat milk products has increased gradually by its biological-chemical properties and health benefits. A common practice of milk producers is its adulteration with cheese whey (CW), which affects milk processing industries as it has a negative effect on yield and nutritional characteristics of the product to obtain. Therefore, it is necessary a rapid, effective, sensitive and accurate methodology to detect CW in goat milk. Immunoassays have these requirements. Glycomacropeptide (GMP) is obtained from the κ-casein during cheese making by the action of chymosin, being present in CW but not in raw milk. In this work it was performed two immunoassays, immunoblot and sandwich ELISA system, to identify goat GMP (GMPc) as indicative of milk adulterated with CW, using a polyclonal anti-GMP bovine (GMPb) antibody. First, it was necessary to test the reactivity of the polyclonal anti-GMPb antibody (previously developed in our laboratory) against GMPc. The antibody detects two protein fractions (11.26 and 9.12 kDa) corresponding to GMPc, with different molecular weights from those of commercial GMPb. The immunoblot has a sensitivity of 0.5% v/v, with a full time development of 8h. The ELISA system was developed and the title of the reactants was fixed: capture antibody (anti-GMP), antigen (GMPc) and biotin-labeled antibody (anti-GMP*). The minimum reaction time that gave the highest absorbance was also analyzed. The results were: 0.2254 μg/ml of anti-GMP, 0.0073 μg/ml of anti-GMP * and 0.75 μg/ml of cGMP. Incubation times of the reactants were 1h for the goat CW, 1h for anti-GMP*, 1h for enzyme Extravidina ® and 1 h for peroxidase substrate OPD, with a total duration of the methodology of 4.5h, this assay had 0.0019% (v/v) for LQ. Both immunoassays can be used in milk industries to detect milk adulteration.