Papel de la vasopresina en la fibrogénesis hepática en rata con anastomosis porto-cava crónica

Abstract

RESUMEN Las enfermedades hepáticas se caracterizan por la aparición descontrolada de fibras de colágeno en el parénquima hepático, situación que conduce a insuficiencia hepática y cirrosis. Se ha demostrado que las células inmunes poseen receptores de arginina vasopresina (AVP) y que esta hormona posee efectos inmunestimulantes, y que su deficiencia induce reversión de la fibrosis. En esta tesis, se propone que el bloqueo específico de los receptores de AVP puede mejorar las funciones de los órganos y reducir la fibrosis en un modelo animal de enfermedad hepática crónica (anastomosis portocava). Para investigar esta hipótesis, ratas Wistar macho se dividieron en los siguientes grupos: 1) Control, 2) Anastomosis portocava (APC), 3) lobectomía hipofisiaria neurointermedia (LNI), 4) APC+LNI, 5) APC+conivaptán (APC+CV) (antagonista de los receptores V1a-V2 de AVP). Los grupos 2, 4 y 5 fueron sometidos a APC al inicio del experimento y sacrificados 16 semanas después. El grupo 3 fue sometido a LNI al inicio del experimento y sacrificado a la semana 8. A la semana 8, los grupos APC+LNI y APC+CV iniciaron el respectivo tratamiento. Al sacrificio, se realizaron los siguientes análisis: pruebas de funcionamiento hepático en suero, contenido de glucógeno hepático, histopatología hepática (incluyendo cantidad de colágeno y áreas de fibrosis), determinación de la expresión de alfa-actina de músculo liso (α-SMA) por inmunohistoquímica e inmunofluorescencia y la expresión de marcadores de fibrosis hepática por qPCR. Los resultados mostraron que en los grupos APC+LNI y APC+CV disminuyeron los niveles séricos de AST y bilirrubina, se restablecieron los niveles de albúmina sérica y el contenido de glucógeno hepático, hubo reversión de las alteraciones histológicas con disminución en los tabiques fibrosos y contenido de colágeno. El análisis molecular e inmunohistológico demostró que, en comparación con el grupo APC, los tratamientos disminuyeron la expresión génica de TGF-β y α-SMA. En conclusión, los resultados sugieren que la deficiencia de vasopresina o el bloqueo de los receptores V1a-V2 de AVP por el conivaptán juegan un papel importante en la reversión del daño hepático en la APC. Estos resultados también abren la posibilidad real de que el conivaptán pueda ser utilizado para el tratamiento de pacientes con fibrosis/cirrosis hepática crónica.

ABSTRACT Liver diseases are characterized by the uncontrolled appearance of collagen fibers in the hepatic parenchyma, a situation that leads to liver failure and cirrhosis. It has been demonstrated that immune cells possess arginine vasopressin (AVP) receptors, and this hormone has immunostimulating effects, with its deficiency inducing fibrosis reversal. In this thesis, it is proposed that specific blockade of AVP receptors can improve liver function and reduce fibrosis in an animal model of chronic liver disease (portocaval anastomosis). To investigate this hypothesis, male Wistar rats were divided into the following groups: 1) Control, 2) Portocaval anastomosis (PCA), 3) neurointermediate lobectomy (NIL), 4) PCA+NIL and 5) PCA+conivaptan (PCA+CV) (V1a-V2 AVP receptor antagonist). Groups 2, 4, and 5 were subjected to PCA at the beginning of the experiment and sacrificed 16 weeks later. Group 3 was subjected to NIL at the beginning of the experiment and sacrificed 8 weeks later. At week 8, the PCA+NIL and PCA+CV groups initiated their respective treatments. At sacrifice, the following analyses were performed: serum liver function tests, hepatic glycogen content, hepatic histopathology including collagen amount and fibrosis areas. Smooth muscle alpha-actin (α-SMA) expression was determined by immunohistochemistry and immunofluorescence, and hepatic fibrosis markers were determined by qPCR. The results showed that serum AST and bilirubin levels decreased in the PCA+NIL and PCA+CV groups, with serum albumin levels and hepatic glycogen content being restored. There was a reversal of histological alterations with decreased fibrous septa and collagen content. Molecular and immunohistological analyses demonstrated that, compared to the PCA group, the treatments decreased TGF-β and α-SMA gene expression. In conclusion, the results suggest that vasopressin deficiency or blockade of V1a-V2 AVP receptors by conivaptan play an important role in reversing hepatic damage in PCA. These results also open the real possibility that conivaptan can be used for the treatment of patients with chronic hepatic fibrosis/cirrhosis.