RESUMEN
El diclofenaco es un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE) de venta libre que presenta elevados índices de consumo a nivel mundial, en el tratamiento de problemas articulares, principalmente. Existen reportes en Europa y Estados Unidos que indican que produce daño
hepático en poblaciones susceptibles mayores de 60 años con patologías primarias, sin
embargo, en México hay pocos reportes. Actualmente existe una marcada tendencia a utilizar compuestos naturales para prevenir y/o revertir daños en el organismo. Se ha reportado que la
pulpa del fruto de Opuntia (tuna), presenta una cantidad importante de compuestos bioactivos como vitamina C, fenoles y betalaínas (betanina) con actividad antioxidante y efectos benéficos para la salud intestinal, cardiovascular y hepática. Reportes indican que la especie O. robusta
(OR) se distribuye de forma silvestre y no presenta riesgo de extinción, además, se ha
demostrado que el cladodio (nopal) provee efectos benéficos en el metabolismo humano, pero
existen pocos estudios sobre la capacidad nutracéutica del fruto (tuna) por lo que en el presente
trabajo se evaluó el efecto protector del extracto del fruto de OR en la toxicidad hepática aguda
inducida con diclofenaco. La caracterización nutracéutica in vitro del extracto del fruto de OR mediante técnicas espectrofotométricas se llevó a cabo para la cuantificación de compuestos fenólicos, flavonoides y betalaínas, así comola capacidad antioxidante se realizó mediante los ensayos ABTS•+, DPPH y FRAP. Se identficaron los principales biocompuestos presentes en el extracto de OR mediante el análisis UPLC-QTOF-MS/MS. La capacidad hepatoprotectora del extracto se llevó a cabo en un modelo in vivo de daño hepático agudo inducido con diclofenaco. Se organizaron 8 grupos de ratas Wistar macho (200-250 g) que recibieron profilácticamente
los tratamientos del extracto de O. robusta (800 mg/kg/5días), betanina (Bet, 25 mg/kg/5días) y
N-acteylcysteina (NAC; 40 mg/kg/5días) seguido de una sola dosis de DF (75 mg/kg). Se realizó
un análisis histopatológico (H&E y PAS), se monitorearon biomarcadores séricos de lesión
hepática (AST y ALT). En tejido hepático se cuantificaron las concentraciones de los
biomarcadores de estrés oxidativo (MDA y GSH) y se analizó la expresión de genes de
respuesta antioxidante inducible modulados por el factor nuclear Nrf2 (Sod1, Sod2, Cat, Gclc),
citoprotectores (Hmox1, Nqo1) y como biomarcador de muerte celular la expresión génica de
caspas-3 activa (Casp3) y su inmunolocalización in situ. Nuestros resultados muestran que la alta capacidad antioxidante del extracto del fruto de OR se debe a la presencia de compuestos
bioactivos como betalaínas, ácidos fenólicos y vitamina C, mediante la activación de la vía de
Nrf2.
ABSTRACT
Diclofenac is an over-the-counter non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) that presents high rates of consumption worldwide, mainly in the treatment of joint problems. There are reports
in Europe and the United States indicating that it causes liver damage in susceptible populations
over 60 years of age with primary pathologies, however, in Mexico there are few reports. Currently there is a marked tendency to use natural compounds to prevent and/or reverse damage to the body. It has been reported that the pulp of the Opuntia spp. (prickly pear) fruit presents a significant amount of bioactive compounds such as vitamin C, phenols and betalains
(betanin) with antioxidant activity and beneficial effects for intestinal, cardiovascular and liver
health. Reports indicate that the species O. robusta (OR) is distributed in the wild and does not
present a risk of extinction; furthermore, it has been reported that the cladode (nopal) provides
beneficial effects on human metabolism, but there are few studies on the nutraceutical capacity
of the fruit (prickly pear) so in the present work the protective effect of the extract of OR fruit in
the acute hepatic toxicity induced with diclofenac was evaluated. The in vitro nutraceutical characterization of the OR fruit extract by means of spectrophotometric techniques was carried out for the quantification of phenolic compounds, flavonoids, and betalains as well as the
antioxidant capacity by means of the ABTS•+, DPPH, and FRAP assays. The main biocompounds present in the extract of O. robusta by means of UPLC-QTOF-MS/MS analysis. The hepatoprotective capacity of the extract was carried out in an in vivo model of diclofenacinduced
acute liver injury. Eight groups of male Wistar rats (200-250 g) were organized and
prophylactically received the treatments of O. robusta fruit extract (800 mg/kg/5 days), betanin (Bet, 25 mg/kg/5 days) and N-acteylcysteine (NAC; 40 mg/kg/5 days) followed by a single dose
of DF (75 mg/kg). Histopathological analysis (H&E and PAS) was performed, serum biomarkers of liver injury (AST and ALT) were monitored. In liver tissue, the concentrations of oxidative
stress biomarkers (MDA and GSH) were quantified and the expression of inducible antioxidant response genes modulated by the nuclear factor Nrf2 (Sod1, Sod2, Cat, Gclc), cytoprotective (Hmox1, Nqo1) and active caspase-3 gene expression (Casp3) and its immunolocalization in
situ as a biomarker of cell death Our results show that the high antioxidant capacity of the OR fruit extract is due to the presence of bioactive compounds such as betalains, phenolic acids and
vitamin C through the activation of the Nrf2 pathway.
