Estudio del efecto protector de la proteína recombinante SA-F3X-BBL utilizada como inmunógeno en ratones.

Abstract

RESUMEN Según la Organización Mundial de la Salud, el Virus Sincitial Respiratorio (RSV) es el principal agente etiológico de las enfermedades respiratorias agudas y es causa de una alta morbimortalidad principalmente en niños menores de 2 años. La bronquiolitis es el resultado de la infección por RSV. La limitada eficacia de los tratamientos actuales y su alto costo, los hace prácticamente inaccesibles en países subdesarrollados. Tras la infección por RSV en el tracto respiratorio inferior, las células epiteliales secretan citocinas y quimiocinas inflamatorias. Esta respuesta inmune exacerbada promueve la infiltración de células inmunes en los pulmones causando una obstrucción de las vías respiratorias por el abundante moco y daño en el tejido pulmonar. Es por ello que resulta de suma importancia diseñar estrategias preventivas contra la infección por RSV. El RSV tiene alrededor de su estructura dos grandes glicoproteínas: la G de adhesión y la F de fusión que dirigen las respuestas neutralizantes. Es por ello que este trabajo se enfocó en determinar si una versión recombinante del virus (RSV-F) y unido con un core de estreptavidina (SA) y un coestimulador (4-1BBL), posee capacidad inmunogénica en un modelo in vivo. La proteína recombinante SA-F3X-BBL fue expresada en E. coli y usada como inmunógeno en ratones C57BL/6. Utilizando una prueba de ELISA para cuantificar IgG anti-RSV, se mostró que el protocolo de inmunización intramuscular con SA-F3X-BBL no indujo la producción de IgG sérica específica de RSV en los animales a los 14 días tras la primo-inmunización. Los sueros de animales control e inmunizados con la proteína SA-F3X-BBL fueron preincubados con el RSV para luego evaluar la inhibición de replicación viral mediante qPCR y la capacidad neutralizante de los anticuerpos generados por los animales inmunizados. La replicación viral se disminuyó significativamente con el suero de animales inmunizados con 50 μg de proteína. Se determinó que la proteína induce una respuesta de anticuerpos neutralizantes al encontrarse disminución del efecto citopático en una línea celular susceptible a la infección. La concentración más adecuada de la proteína recombinante que indujo el título de anticuerpos neutralizantes más alto fue de 20 μg.

ABSTRACT According to the World Health Organization, Respiratory Syncytial Virus (RSV) is the main etiological agent of acute respiratory diseases and is the cause of high morbidity and mortality, mainly in children under 2 years of age. Bronchiolitis is the result of RSV infection. The limited efficacy of the current treatments and their high cost make their use practically inaccessible in underdeveloped countries. Following RSV infection in the lower respiratory tract, epithelial cells secrete inflammatory cytokines and chemokines. This exacerbated immune response promotes the infiltration of immune cells in the lungs causing an obstruction of the airways by the abundant mucus and damage to the lung tissue. That is why it is extremely important to design preventive strategies against RSV infection. RSV has around its structure two large glycoproteins: protein G of adhesion and protein F of fusion, that address the neutralizing responses. The aim of this work was to determine whether a recombinant version of the virus (RSV-F) bounded to a streptavidin core (SA) and to a costimulator (4-1BBL) possesses immunogenic capacity in an in vivo model. The recombinant protein SA-F3X-BBL was expressed in E. coli and used as an immunogen in C57BL / 6 mice. Using an ELISA assay to quantify IgG anti-RSV, we showed that the intramuscular immunization protocol with SA-F3X-BBL did not induce the production of serum RSV-specific total IgG by animals at day 14 after the first immunization. Sera from control animals immunized with the SA-F3X-BBL protein were preincubated with RSV to then evaluate the inhibition of viral replication by qPCR and the neutralizing capacity of the antibodies generated by the immunized animals. Viral replication was significantly decreased with serum from animals immunized with 50 μg of protein. It was determined that the protein induces a neutralizing antibody response when a decrease in CPE is found in a cell line susceptible to infection. The most suitable concentration of the recombinant protein that induced the highest neutralizing antibody titer was 20 μg.