Efecto de los antagonistas y agonistas de vasopresina sobre factores angiogénicos en la línea celular OV-90 de cáncer epitelial de ovario humano

Abstract

Resumen El cáncer epitelial de ovario (CEO) es la neoplasia ginecológica más letal debido a que se detecta en etapas avanzadas y un porcentaje alto de las pacientes presenta resistencia a la quimioterapia. Uno de los mecanismos más importantes en el desarrollo del cáncer es la angiogénesis, que involucra la formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de vasos ya existentes. En el proceso de angiogénesis participan principalmente el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y su receptor VEGFR2. Trabajos previos han mostrado que las células mesangiales del riñón poseen receptores de AVP y responden a ella secretando varios factores, entre los cuales se encuentra el VEGFA. Por otro lado, investigaciones sobre cáncer y AVP, han mostrado que los agonistas de AVP disminuyen la angiogénesis. Una característica común de las células mesangiales y las células del CEO es su mismo origen epitelial, sin embargo, a la fecha no se han descrito receptores de AVP en las células del CEO ni en las células epiteliales de ovario sanos. Basados en la información conocida, podemos suponer que las células epiteliales del cáncer de ovario podrían poseen receptores de AVP y que de alguna manera podrían ser parte del mecanismo carcinogénico de este tipo de cáncer. Considerando lo anterior, este trabajo tiene como objetivos establecer si la línea celular OV-90 de cáncer epitelial de ovario expresan el factor VEGFA y su receptor VEGFR2 y si estas proteínas son reguladas por agonistas y antagonistas de los receptores de AVP. Material y Métodos. Se utilizó la línea celular OV-90 de cáncer epitelial de ovario. A las 24 y 48 horas de cultivo, se determinó por inmunofluorescencia, la presencia de los receptores V1a y V2 de AVP y VEGFR2 en las células OV-90. 2) Se evaluó la expresión de las proteínas VEGFA y VEGFR2 por Western blot en células OV-90 sometidas a diferentes dosis de agonistas y antagonistas de AVP. Se consideraron las mejores dosis para los diferentes fármacos, aquellas que no mostraron efectos citotóxicos: a) desmopresina (Dp) 1 mM (agonista específico para los receptores V2 de AVP), b) Conivaptán (CON) (100 ng/ml), (antagonista no peptídico de los receptores V1a-V2 de AVP), y c) OPC-21268 (140 mM) (antagonista no peptídico específico de los receptores V1a AVP). Resultados. 1) La inmunofluorescencia mostró la presencia de los receptores V1a y V2 de AVP y el receptor VEGFR2 en las células cancerosas OV-90. Los resultados del Western blot mostraron la presencia de las proteínas VEGF y VEGFR, sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en la expresión proteica entre los grupos control y los tratados con agonistas y antagonistas de AVP. Los resultados mostraron además que ninguna de las dosis empleadas del agonista Dp ni de los antagonistas de AVP conivaptán OPC-21268 tuvieron efectos citotóxicos. Se mostró por primera vez la presencia del VEGFA y su receptor VEGFR en las células del OV-90. 2) A las dosis utilizadas no se encontraron efectos citotóxicos de los compuestos agonista y antagonistas de los receptores de AVP. Es necesario hacer más experimentos utilizando curvas dosis-respuesta para cada uno de los compuestos a diferentes tiempos para realmente determinar si las células OV-90 experimentan cambios significativos en la expresión de las proteínas VEGFA y VEFR2. Palabras clave: Vasopresina, Cáncer Epietelial de Ovario, Angiogénesis, VEGF

Abstract Epithelial ovarian cancer (CEO) is the most lethal gynecological neoplasm because it is detected in advanced stages and a high percentage of patients are resistant to chemotherapy. One of the most important mechanisms in cancer development is angiogenesis, which involves the formation of new blood vessels from existing ones. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor, VEGFR2, both participate mainly in the angiogenesis process. Previous work has shown that the mesangial cells of the kidney have vassopreson (AVP) receptors and respond to it by secreting several factors, among which is VEGFA. On the other hand, research on cancer and AVP has shown that AVP agonists decrease angiogenesis. A common characteristic of mesangial cells and CEO cells is their epithelial origin, which is the same, however, to date no AVP receptors have been described in CEO cells or healthy ovarian epithelial cells. Based on the known information, we could assume that ovarian cancer epithelial cells have AVP receptors and that they could somehow be part of the carcinogenic mechanism of this type of cancer. Considering the above, this work aims to establish if the OV-90 epithelial ovarian cancer cell line expresses the VEGFA factor and its receptor VEGFR2, and if these proteins are regulated by agonists and antagonists of AVP receptors. Material and methods. The OV-90 epithelial ovarian cancer cell line was used. Past 24 and 48 hours of culture, the presence of AVP and VEGFR2 receptors V1a and V2 in OV-90 cells was determined by immunofluorescence. 2) The expression of VEGFA and VEGFR2 proteins was evaluated by Western blot in OV-90 cells subjected to different doses of AVP agonists and antagonists. The best doses considered for the different drugs, were those that did not produce cytotoxic effects: a) desmopressin (Dp) 1 mM (specific agonist for AVP V2 receptors), b) Conivaptan (CON) (100 ng / ml), (nonpeptide antagonist of AVP V1a-V2 receptors), and c) OPC-21268 (140 mM) (specific non-peptide antagonist of V1a AVP receptors). Results. 1) Immunofluorescence showed the presence of AVP V1a and V2 receptors and VEGFR2 receptor on OV- 90 cancer cells. The results of the Western blot showed the presence of VEGF and VEGFR proteins, however, no significant differences were found in protein expression between control groups and those treated with AVP agonists and antagonists. The results also showed that none of the doses of the Dp agonist or the AVP antagonists withivaptan OPC-21268 had cytotoxic effects. The presence of VEGFA and its receptor VEGFR was shown for the first time in OV- 90 cells. 2) At the doses used, no cytotoxic effects of the AVP receptor agonist and antagonist compounds were found. It is necessary to carry out more experiments using dose-response curves for each of the compounds at different times to really determine if the OV-90 cells undergo significant changes in the expression of the VEGFA and VEFR2 proteins. Key words: Vasopressin, Epithelial ovarian cancer, Angiogenesis, VEGF