Resumen
El cáncer epitelial de ovario (CEO) es la neoplasia ginecológica más letal debido a
que se detecta en etapas avanzadas y un porcentaje alto de las pacientes presenta
resistencia a la quimioterapia. Uno de los mecanismos más importantes en el
desarrollo del cáncer es la angiogénesis, que involucra la formación de nuevos
vasos sanguíneos a partir de vasos ya existentes. En el proceso de angiogénesis
participan principalmente el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y su
receptor VEGFR2. Trabajos previos han mostrado que las células mesangiales del
riñón poseen receptores de AVP y responden a ella secretando varios factores,
entre los cuales se encuentra el VEGFA. Por otro lado, investigaciones sobre cáncer
y AVP, han mostrado que los agonistas de AVP disminuyen la angiogénesis. Una
característica común de las células mesangiales y las células del CEO es su mismo
origen epitelial, sin embargo, a la fecha no se han descrito receptores de AVP en
las células del CEO ni en las células epiteliales de ovario sanos. Basados en la
información conocida, podemos suponer que las células epiteliales del cáncer de
ovario podrían poseen receptores de AVP y que de alguna manera podrían ser parte
del mecanismo carcinogénico de este tipo de cáncer. Considerando lo anterior, este
trabajo tiene como objetivos establecer si la línea celular OV-90 de cáncer epitelial
de ovario expresan el factor VEGFA y su receptor VEGFR2 y si estas proteínas son
reguladas por agonistas y antagonistas de los receptores de AVP. Material y
Métodos. Se utilizó la línea celular OV-90 de cáncer epitelial de ovario. A las 24 y
48 horas de cultivo, se determinó por inmunofluorescencia, la presencia de los
receptores V1a y V2 de AVP y VEGFR2 en las células OV-90. 2) Se evaluó la
expresión de las proteínas VEGFA y VEGFR2 por Western blot en células OV-90
sometidas a diferentes dosis de agonistas y antagonistas de AVP. Se consideraron
las mejores dosis para los diferentes fármacos, aquellas que no mostraron efectos
citotóxicos: a) desmopresina (Dp) 1 mM (agonista específico para los receptores V2
de AVP), b) Conivaptán (CON) (100 ng/ml), (antagonista no peptídico de los
receptores V1a-V2 de AVP), y c) OPC-21268 (140 mM) (antagonista no peptídico específico de los receptores V1a AVP). Resultados. 1) La inmunofluorescencia
mostró la presencia de los receptores V1a y V2 de AVP y el receptor VEGFR2 en
las células cancerosas OV-90. Los resultados del Western blot mostraron la
presencia de las proteínas VEGF y VEGFR, sin embargo, no se encontraron
diferencias significativas en la expresión proteica entre los grupos control y los
tratados con agonistas y antagonistas de AVP. Los resultados mostraron además
que ninguna de las dosis empleadas del agonista Dp ni de los antagonistas de AVP
conivaptán OPC-21268 tuvieron efectos citotóxicos.
Se mostró por primera vez la presencia del VEGFA y su receptor VEGFR en las
células del OV-90. 2) A las dosis utilizadas no se encontraron efectos citotóxicos de
los compuestos agonista y antagonistas de los receptores de AVP. Es necesario
hacer más experimentos utilizando curvas dosis-respuesta para cada uno de los
compuestos a diferentes tiempos para realmente determinar si las células OV-90
experimentan cambios significativos en la expresión de las proteínas VEGFA y
VEFR2.
Palabras clave: Vasopresina, Cáncer Epietelial de Ovario, Angiogénesis, VEGF
Abstract
Epithelial ovarian cancer (CEO) is the most lethal gynecological neoplasm because
it is detected in advanced stages and a high percentage of patients are resistant to
chemotherapy. One of the most important mechanisms in cancer development is
angiogenesis, which involves the formation of new blood vessels from existing ones.
Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor, VEGFR2, both
participate mainly in the angiogenesis process. Previous work has shown that the
mesangial cells of the kidney have vassopreson (AVP) receptors and respond to it
by secreting several factors, among which is VEGFA. On the other hand, research
on cancer and AVP has shown that AVP agonists decrease angiogenesis. A
common characteristic of mesangial cells and CEO cells is their epithelial origin,
which is the same, however, to date no AVP receptors have been described in CEO
cells or healthy ovarian epithelial cells. Based on the known information, we could
assume that ovarian cancer epithelial cells have AVP receptors and that they could
somehow be part of the carcinogenic mechanism of this type of cancer. Considering
the above, this work aims to establish if the OV-90 epithelial ovarian cancer cell line
expresses the VEGFA factor and its receptor VEGFR2, and if these proteins are
regulated by agonists and antagonists of AVP receptors. Material and methods.
The OV-90 epithelial ovarian cancer cell line was used. Past 24 and 48 hours of
culture, the presence of AVP and VEGFR2 receptors V1a and V2 in OV-90 cells was
determined by immunofluorescence. 2) The expression of VEGFA and VEGFR2
proteins was evaluated by Western blot in OV-90 cells subjected to different doses
of AVP agonists and antagonists. The best doses considered for the different drugs,
were those that did not produce cytotoxic effects: a) desmopressin (Dp) 1 mM
(specific agonist for AVP V2 receptors), b) Conivaptan (CON) (100 ng / ml), (nonpeptide
antagonist of AVP V1a-V2 receptors), and c) OPC-21268 (140 mM) (specific
non-peptide antagonist of V1a AVP receptors). Results. 1) Immunofluorescence
showed the presence of AVP V1a and V2 receptors and VEGFR2 receptor on OV-
90 cancer cells. The results of the Western blot showed the presence of VEGF and
VEGFR proteins, however, no significant differences were found in protein expression between control groups and those treated with AVP agonists and
antagonists. The results also showed that none of the doses of the Dp agonist or the
AVP antagonists withivaptan OPC-21268 had cytotoxic effects.
The presence of VEGFA and its receptor VEGFR was shown for the first time in OV-
90 cells. 2) At the doses used, no cytotoxic effects of the AVP receptor agonist and
antagonist compounds were found. It is necessary to carry out more experiments
using dose-response curves for each of the compounds at different times to really
determine if the OV-90 cells undergo significant changes in the expression of the
VEGFA and VEFR2 proteins.
Key words: Vasopressin, Epithelial ovarian cancer, Angiogenesis, VEGF
