La cavidad oral es un ambiente rico en biopelículas microbianas, que representan un
problema en el tratamiento endodóntico, durante el cual para preservar su esterilidad se
usan soluciones de hipoclorito de sodio. El presentre trabajo tuvo como objetivo el uso de
una solución alternativa hiperosmótica preparada con sorbato de potasio, cloruro de sodio,
etanol, agua y ácido clorhídrico para mejorar su actividad antimicrobiana y disminuir su
toxicidad. Así, se evaluó el efecto antimicrobiano de esta solución sobre biopelículas
microbianas multiespecie y la toxicidad ejercida sobre el modelo celular de cultivo de
fibroblastos de ligamento periodontal humano. Esta solución se probó sobre biopelículas
monoespecie de Candida albicans y Enterococcus faecalis y en biopelículas mixtas de
ambos microorganismos. Las biopelículas empleadas se formaron durante 24, 48 y 72 h en
cajas de 96 pozos, y el tratamiento con la solución fue por 15 minutos, posteriormente las
biopelículas fueron contrastadas con cristal violeta. La evaluación del efecto de la solución
se realizó también sobre biopelículas crecidas en portaobjetos durante 48 y 72 horas, con
el fin de obtener UFC y observar al microscopio confocal. En todos los casos como control
positivo se usó hipoclorito de sodio al 5.25% (NaOCl) y como control negativo agua
destilada estéril.
Los experimentos en cajas de 96 pozos mostraron disminución significativa en las
biopelículas de C. albicans, E. faecalis y biopelículas mixtas de 24 y 48 h. La biopelícula
mixta de 72 h presentó disminución, pero no significativa. No hubo crecimiento de UFC
cuando se trató con la solución hiperosmótica, lo cual fue corroborado por Microscopía
confocal. Tampoco hubo diferencia significativa en la reducción de biopelícula en ambos
tiempos de maduración y en los 3 tipos de biopelícula.
Para la prueba de citotoxicidad se cultivaron fibroblastos derivados de ligamento periodontal
humano hasta 80% de confluencia, y se realizó tratamiento con la solución hiperosmótica
durante 30, 60, 90, 120, 150 y 180 min, la viabilidad se determinó mediante un ensayo de
MTT. Para lo anterior se formaron 4 grupos experimentales uno tratado con NaOCl al
5.25%, otro tratado con NaOCl al 2.5%, un grupo tratado con la solución hiperosmótica y
otro tratado con PBS como grupo control negativo. Los resultados obtenidos mediante el
ensayo de MTT mostraron que la solución hiperosmótica no es citotóxica. Por lo anterior la
presente tesis muestra que la solución hiperosmótica presenta efecto antibacteriano sobre
biopelículas microbianas y no es citotóxica para los fibroblastos en cultivo.
Palabras clave: C. albicans, E. Faecalis, Solución hiperosmótica, citotoxicidad
The oral cavity is an environment rich in microbial biofilms, which represent a problem in
endodontic treatment, during which sodium hypochlorite solutions are used to preserve its
sterility. The present work aimed to use a hyperosmotic alternative solution prepared with
potassium sorbate, sodium chloride, ethanol, water and hydrochloric acid to improve its
antimicrobial activity and decrease its toxicity. Thus, the antimicrobial effect of this solution
on multispecies microbial biofilms and the toxicity exerted on the cell model of human
periodontal ligament fibroblast culture were evaluated. This solution was tested on
monospecies biofilms of Candida albicans and Enterococcus faecalis and on mixed biofilms
of both microorganisms. The biofilms used were formed during 24, 48 and 72 h in 96 wells
plates, and the treatment with the solution was for 15 minutes, later the biofilms were
contrasted with crystal violet. The evaluation of the effect of the solution was also carried
out on biofilms grown on slides for 48 and 72 hours, in order to obtain CFU and observe
under the confocal microscope. In all cases, 5.25% sodium hypochlorite (NaOCl) was used
as a positive control and sterile distilled water was used as a negative control.
Experiments in 96-well plates showed significant decrease in biofilms of C. albicans, E.
faecalis and mixed biofilms of 24 and 48 h. The 72 h mixed biofilm showed a decrease, but
not significant. There was no CFU growth when treated with the hyperosmotic solution,
which was corroborated by confocal microscopy. There was also no significant difference in
biofilm reduction at both biofilms maturation times and in the 3 types of biofilm.
For the cytotoxicity test, fibroblasts derived from human periodontal ligament were cultured
up to 80% confluence, and treatment with the hyperosmotic solution was performed for 30,
60, 90, 120, 150 and 180 min, the viability was determined by means of an MTT test. . For
this, 4 experimental groups were formed, one treated with NaOCl 5.25%, another treated
with NaOCl 2.5%, one group treated with the hyperosmotic solution and another treated with
PBS as a negative control group. The results obtained by the MTT test showed that the
hyperosmotic solution is not cytotoxic. Therefore, the present thesis shows that the
hyperosmotic solution has an antibacterial effect on microbial biofilms and is not cytotoxic
for fibroblasts in culture.
