RESUMEN
Entamoeba histolytica (E. histolytica) es un protozoo parásito anaerobio causante de amebiasis. La virulencia amebiana es el resultado de la compleja interacción huésped-parásito que implica la producción de diversos conjuntos de factores de virulencia, que se atenúan por el cultivo in vitro prolongado. Además, E. histolytica expresa proteínas que son homólogas a proteínas humanas, utilizándolas como factores de virulencia, de interés a nosotros estas proteínas de E. histolytica son semejantes a receptores a citocinas humanas. Hemos demostrado previamente que E. histolytica puede fijar el interferón gamma exógeno (IFN-γ) posiblemente mediado por un receptor similar a la proteína del receptor IFN-γ humano 1. En este estudio, determinamos si el IFN-γ exógeno modula la virulencia del parásito E. histolytica. La proteína similar receptora a IFN-γ se identificó en la superficie de E. histolytica por inmunofluorescencia, análisis inmunoblot en fracciones de membranas de amebas usando un anticuerpo anti IFN-γR1, espectrometría de masas y análisis in silico. La interacción del IFN-γ recombinante con E. histolytica aumentó significativamente la expresión de Cisteína proteinasa A1 (EhCP-A1), EhCP-A2, EhCP-A4, EhCP-A5, Amebapore A (AP-A), Ciclooxigenasa 1 (Cox-1), Gal-lectina (Hgl) y peroxiredoxina (Prx) de forma dependiente del tiempo. Funcionalmente la interacción con esta citosina mejoró la eritrofagocitosis por de E. histolytica fue abrogada con el inhibidor de STAT-1, fludarabina. De igual manera mejoró la quimiotaxis de E. histolytica, de forma similar a la IL-8 y la destrucción de las monocapas de células Caco-2 y HepG2. Por ultimo in vivo se observó mayor daño en el absceso hepático amebiano en los hámsters, generado por las amibas interactuadas previamente con IFN-γ. Estos resultados demuestran que los trofozoítos de E. histolytica expresan un receptor tipo IFN-γ, que es funcional y pueden desempeñar un papel en la patogénesis de la enfermedad y/o en la evasión de la respuesta inmune.
Palabras clave: Entamoeba histolytica, amebiasis, cisteína proteasas, IFN-γ Receptor 1, eritrofagocitosis, efecto citopático.
ABSTRACT
Entamoeba histolytica (E. histolytica) is an anaerobic parasitic protozoan that causes amebiasis. The amoebic virulence is the result of the complex host-parasite interaction that involves the production of various sets of virulence factors, which are attenuated by prolonged in vitro culture. In addition, E. histolytica expresses proteins that are homologous to human proteins, using them as virulence factors, of interest to us these E. histolytica proteins are similar to human cytosine receptors. We have previously shown that E. histolytica can fix exogenous gamma interferon (IFN-γ) possibly mediated by a receptor similar to the human IFN-γ receptor protein 1. In this study, we determine whether exogenous IFN-γ modulates the virulence of E. histolytica parasite. The IFN-γ receptor-like protein was identified on the surface of E. histolytica by immunofluorescence, immunoblot analysis in amoebae membrane fractions using an anti IFN-γR1 antibody, mass spectrometry and in silico analysis. The interaction of recombinant IFN-γ with E. histolytica significantly increased the expression of Cysteine Proteinase A1 (EhCP-A1), EhCP-A2, EhCP-A4, EhCP-A5, Amebapore A (AP-A), Cyclooxygenase 1 (Cox- 1), Gal-lectin (Hgl) and peroxiredoxin (Prx) in a time-dependent manner. Functionally the interaction with this cytosine improved erythrophagocytosis due to E. histolytica was abrogated with the STAT-1 inhibitor, fludarabine. Similarly, the chemotaxis of E. histolytica improved, similar to IL-8 and the destruction of the Caco-2 and HepG2 cell monolayers. Finally, in vivo, greater damage was observed in amoebic liver abscess in hamsters, generated by the amoebae previously interacting with IFN-γ. These results demonstrate that E. histolytica trophozoites express an IFN-γ type receptor, which is functional and may play a role in the pathogenesis of the disease and / or in evading the immune response.
Keywords: Entamoeba histolytica, amoebiasis, cysteine proteases, IFN-γ Receptor 1, erythrophagocytosis, Cytopathic effect.
