Determinación del contenido de esteviósidos y rebaudiósidos, de la planta Stevia rebaudiana desarrollada in vitro, así como su análisis comparativo en ejemplares cultivados en campo

Abstract

Stevia rebaudiana produce compuestos que pueden ser utilizados como edulcorantes dietéticos. El presente trabajo se enfocó en realizar una serie de técnicas semicuantitativas y cuantitativas para llevar a cabo un análisis comparativo de la producción de estevioglucósidos en diferentes tejidos de Stevia rebaudiana cultivados in vitro, en contraste con ejemplares cultivados en campo. Se obtuvieron muestras in vitro a partir de ejemplares provenientes de Aguascalientes y de Zacatecas, cuyos segmentos nodales fueron cultivados en medio Murashige y Skoog suplementado, los brotes se formaron a los 25 días de cultivo, obteniéndose hasta cinco por cada explante. El mejor tratamiento para inducción de brotes fue BA 1 mg L-1 y para inducción de tejido calloso fue TDZ 1 mg L-1; el resto de las muestras fueron variedades cultivadas en campo, originarias del sureste de México. Los extractos obtenidos a partir de todas las muestras se analizaron a través de cromatografía en capa fina y el software Sweday® para detectar la presencia de eteviósido y Rebaudiósido A. Ademas se realizó el anáisis por cromatografía líquida de alta resolución simple y sensible (HPLC) para la cuantificación de los mismos, con un equipo de HPLC Perkin Elmer series 200, columna de fase reversa C18, (longitud: 250 mm; diámetro interior: 4,6 mm, tamaño de partícula: 5 micras) DETECTOR-UV-VIS, los resultados señalan que las muestras obtenidas in vitro presentaron muy baja concentración de esteviósido y Reb. A. Las muestras de campo variedad Morita II, presentan un promedio de 1.96% de esteviósido y un promedio de 9.20% de Rebaudiósido A; la variedad criolla estudiada en este trabajo tiene una concentración promedio de esteviósido de 1.03% y de Rebaudiósido A de 4.86%; las variedades SM5 y SM4 mostraron un promedio de concentración de esteviósido de 2.34% y de rebaudiósido de 10.54%. En México no existen estudios enfocados en la cuantificación y comparación sobre la producción de los compuestos dulces entre plantas de distinto origen (campo/in vitro), por lo tanto el análisis de la producción de esteviósido y Rebaudiósido A convierte los resultados de la presente investigación en una herramienta eficaz, contundente y verificable para deducir cual es la práctica más conveniente en la industria dedicada a la producción masiva y comercial de Stevia rebaudiana.