Abstract:
Stevia rebaudiana produce compuestos que pueden ser utilizados como edulcorantes dietéticos. El presente trabajo se enfocó en realizar una serie de técnicas semicuantitativas y cuantitativas para llevar a cabo un análisis comparativo de la producción de estevioglucósidos en diferentes tejidos de Stevia rebaudiana cultivados in vitro, en contraste con ejemplares cultivados en campo. Se obtuvieron muestras in vitro a partir de ejemplares provenientes de Aguascalientes y de Zacatecas, cuyos segmentos nodales fueron cultivados en medio Murashige y Skoog suplementado, los brotes se formaron a los 25 días de cultivo, obteniéndose hasta cinco por cada explante. El mejor tratamiento para inducción de brotes fue BA 1 mg L-1 y para inducción de tejido calloso fue TDZ 1 mg L-1; el resto de las muestras fueron variedades cultivadas en campo, originarias del sureste de México.
Los extractos obtenidos a partir de todas las muestras se analizaron a través de cromatografía en capa fina y el software Sweday® para detectar la presencia de eteviósido y Rebaudiósido A. Ademas se realizó el anáisis por cromatografía líquida de alta resolución simple y sensible (HPLC) para la cuantificación de los mismos, con un equipo de HPLC Perkin Elmer series 200, columna de fase reversa C18, (longitud: 250 mm; diámetro interior: 4,6 mm, tamaño de partícula: 5 micras) DETECTOR-UV-VIS, los resultados señalan que las muestras obtenidas in vitro presentaron muy baja concentración de esteviósido y Reb. A. Las muestras de campo variedad Morita II, presentan un promedio de 1.96% de esteviósido y un promedio de 9.20% de Rebaudiósido A; la variedad criolla estudiada en este trabajo tiene una concentración promedio de esteviósido de 1.03% y de Rebaudiósido A de 4.86%; las variedades SM5 y SM4 mostraron un promedio de concentración de esteviósido de 2.34% y de rebaudiósido de 10.54%.
En México no existen estudios enfocados en la cuantificación y comparación sobre la producción de los compuestos dulces entre plantas de distinto origen (campo/in vitro), por lo tanto el análisis de la producción de esteviósido y Rebaudiósido A convierte los resultados de la presente investigación en una herramienta eficaz, contundente y verificable para deducir cual es la práctica más conveniente en la industria dedicada a la producción masiva y comercial de Stevia rebaudiana.
