Efecto tóxico de la metformina, insulina y glibenclamida sobre la expresión de péptidos antimicrobianos en macrófagos y células epiteliales infectadas con Mycobacterium tuberculosis

Abstract

En el presente trabajo de investigación se evaluó el efecto de la metformina, insulina y glibenclamida sobre la expresión de péptidos antimicrobianos (HBD2, HBD3, HBD4 y LL-37) en las líneas celulares A459 (neumocitos tipo ll), NCI-H292 (células broncoepiteliales) y THP1 (monocitos/macrófagos) infectados con Mycobacterium tuberculosis (H37Rv). Se evaluó si las diferentes concentraciones de los fármacos presentaban un efecto tóxico sobre la viabilidad de las líneas celulares y se encontró que la viabilidad de estas no se modificó a las 24 horas de tratamiento. Posteriormente se determinó si los fármacos alteraban la expresión de los péptidos antimicrobianos, encontrándose que la insulina y glibenclamida disminuían el péptido HBD4 en la línea celular A549. Posteriormente se evaluó si la disminución de HBD4 en esta línea celular afectaba su capacidad para controlar el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis. Por lo que se realizó la infección de las células con la micobacteria, posteriormente fueran tratadas con metformina, insulina y glibenclamida y se evaluó el mRNA de HBD4 así como Unidades Formadoras de Colonias. Para la expresión genética del mRNA se encontró disminuido el péptido antimicrobiano HBD-4 en las células tratadas con insulina y glibenclamida. En las UFC no se encontró diferencia estadísticamente significativa al comparar los diferentes grupos. El presente trabajo concluye que insulina y glibenclamida disminuyen la expresión de péptido HBD4 en la línea celular A549, pero esto no influye en el control de la micobacteria.

In the present investigation work we evaluated the effect of metformin, insulin and glibenclamide on the expression of antimicrobial peptides (HBD2, HBD3, HBD4 and LL-37) in the cell lines A459 (type II pneumocytes), NCI-H292 (Bronchoepithelial cells) and THP1 (monocytes / macrophages) infected with Mycobacterium tuberculosis (H37Rv). We assessed whether the different concentrations of the drugs had a toxic effect on the viability of the cell lines and found that the viability of these did not change after 24 hours of treatment. It was later determined whether the drugs altered the expression of the antimicrobial peptides. Insulin and glibenclamide decrease the HBD4 peptide in the A549 cell line. It was subsequently assessed whether the decrease in HBD4 in this cell line affected its ability to control the growth of Mycobacterium tuberculosis. As the cells were infected with the mycobacterium, they were subsequently treated with metformin, insulin and glibenclamide, and the HBD4 mRNA was evaluated as well as Colony Forming Units. For the mRNA gene expression, the antimicrobial peptide HBD-4 was found to be decreased in cells treated with insulin and glibenclamide. In the CFU, we did not found statistically significant difference when comparing the different groups. The present study concludes that insulin and glibenclamide decrese the expression of peptide HBD4 in the cell line A549, but this does not influence the control of the mycobacteria.